产品货号：
BTN15-29420
中文名称：
鼠疫耶尔森菌(鼠疫杆菌)荧光定量PCR试剂盒(探针法)
英文名称：
Yersinia pestis qPCR Kit(Probe Method)
产品规格：
50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是以探针法qPCR技术为基础开发的专门用于鼠疫耶尔森菌研究检测的试剂盒。
保存：-20℃，有效期1年。
引物-探针干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入165μL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。
样品DNA、超纯水、核酸纯化试剂盒。
一、稀释标准曲线样品
以101～106拷贝/μL这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本制品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
二、样品DNA的制备
三、Probe qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
四、数据处理
相关搜索：鼠疫耶尔森菌(鼠疫杆菌)荧光定量PCR试剂盒(探针法)，鼠疫杆菌核酸检测，鼠疫杆菌检测，鼠疫耶尔森菌检测，Yersinia pestis qPCR Kit(Probe Method)
鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)也叫做鼠疫杆菌，是鼠疫的病原菌。此菌引起鼠疫，该病是一种人兽共患的自然疫源性烈性传染病，病死率高，易酿成大流行，是我国法定的甲类传染病，对人体健康有较大危害，因此快速检测鼠疫耶尔森菌具有重要的意义。
- 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
- 引物和探针经过优化，分析灵敏度高，可以达到100拷贝/反应。
- 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
- 特异性高，引物是根据鼠疫耶尔森菌DNA高度保守区设计，不会跟其他生物的DNA发生交叉反应。
- 既可用于定性检测，又可用于定量检测。定量检测时线性范围至少为5个数量级。
| 组分 | 规格 |
| 2×Probe qPCR MasterMix | 500μL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 超纯水 | 1mL |
| 鼠疫耶尔森菌qPCR引物-探针干粉 | 50T |
| 鼠疫耶尔森菌qPCR阳性对照(107拷贝/μL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期1年。
引物-探针干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入165μL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。
样品DNA、超纯水、核酸纯化试剂盒。
一、稀释标准曲线样品
以101～106拷贝/μL这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本制品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
- 标记6个离心管，分别为6、5、4、3、2、1。
- 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同)。
- 在6号管中加入5μL 107拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5μL 106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在4号管中加入5μL 105拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得104拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
- 如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步所得第4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次样本制备所要求的起始样本体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
- 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容，也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。
三、Probe qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，6个用于标准曲线。
如果做定性分析并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，1个用于PCR阳性对照(直接用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。 - 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
成分 样品管
N+2个PCR
阴性对照标准曲线样品管
(1～6管)2×Probe qPCR MasterMix 各10μL 10μL 各10μL 鼠疫耶尔森菌qPCR引物-探针混合液 各3μL 3μL 各3μL N+2个待测DNA样本 各7μL 不加 不加 超纯水 不加 7μL 不加 第6步所得标准曲线样品稀释液(1～6号) 不加 不加 各7μL - 盖上盖子后上机，按下面参数进行qPCR：
过程 温度 时间 预变性 95℃ 5min PCR反应
(40个循环)95℃ 15sec 60℃ 1min(采集FAM通道的荧光信号，淬灭基团为BHQ)
四、数据处理
- 如果样本制备阳性对照或PCR阳性对照(包括标曲样本)结果为阴性，则整个实验无效，不需要分析数据，需要重新样本制备，重新进行PCR扩增或跟厂家联系。如果样本制备阴性对照或PCR阴性对照结果为阳性，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析数据，需要跟厂家联系。
- 如果阴性对照和阳性对照均正常，则实验有效，可以进入后续分析。
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须没有读数，或者大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于40。对待测样品，如果其Ct没有读数、大于或等于40则均为阴性，如果小于40则为阳性。
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